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超净工作台在猕猴桃组织培养繁殖与工厂化育苗实验中的应用
发布时间:2012-06-06 08:02:47   浏览:2742

   超净工作台在猕猴桃组织培养繁殖与工厂化育苗实验中的应用

   植物组织具有无限增殖和产生不定芽、不定根的能力。在培养条件适宜时,用一个芽可以培养出许多植株来。其在保持优良砧木及品种种性、进行工厂化育苗方面具有很好的意义。其方法步骤如下。

 

    一、外植体接种与材料消毒

    取田间当年生新梢或一年生枝蔓,去叶,用肥皂水将表面刷洗,并用自来水冲洗干净,剪成一芽一段,放入干净烧杯,拿进超净工作台;先用70%酒精过一下,无菌水(用高压锅,在120℃下,灭菌30分钟的水)冲洗3遍;再用0.1%升汞液消毒5~10分钟,无菌水冲洗3遍;然后用酒精灯火焰消毒过的工具(镊子、剪刀、拨针、解剖刀等)剥去鳞片、叶柄,取出带数个叶原基的幼芽接入培养基,半包埋。

 

    培养基配好后装入广口的罐头瓶、三角瓶或试管,装入量为1~2厘米高。120℃灭菌30分钟后备用。

 

    外植体接种后放到培养室的培养架上培养。培养条件为:光照1000勒克斯,8~10个小时,暗14~16小时;温度25~28℃。培养1~2周,即可看出是否消毒彻底,有无感染。及时检查,将未感染的外植体转接到新的培养瓶内,丢弃已感染的外植体。

 

    二、继代繁殖

    上述接入的外植体培养1~2个月,即可长到2~3厘米长。在超净工作台上,将其剪成约1厘米长茎段,接种到新的培养基中(培养基的配方同上)。剪茎段时所用工具和培养皿(或牛皮纸)都要经过消毒,消毒方法分别同上述酒精灯消毒法和高压消毒法。

 

    其后,大约每25天左右进行一次继代培养。每次的茎段增殖量约为3~4倍。反复进行,直到所需数量。

 

    三、生根

    上述培养的茎段长到2厘米以上时,即可用于生根。生根培养基的成分为上述培养基的大量元素减半,除激素和蔗糖外,其他成分不变。

 

    生根培养基配好后也需高压灭菌(120℃,30分钟)后使用。

 

    生根培养20天左右,茎段上即可长出根,成为完整苗。生根苗长到3~5厘米长时即可锻炼、移栽。

 

    四、生根苗的锻炼、移栽

    (一)锻炼

 

    组培苗在人工培养条件下长期生长,对自然生长环境的适应性减弱。移栽前需要一个过渡阶段,即锻炼。锻炼方法为:将培养瓶移至自然光照下2~3天,打开瓶口2~3天,再移栽。

 

    (二)移栽

 

    移栽时先洗净根上培养基,避免培养基感染杂菌致苗死亡。移栽方法及灌水、遮阳等管理同实生苗移栽。但注意组培苗比较娇嫩,需轻盈操作。

 

    五、工厂化育苗

 

将上述培养基制备及超净工作台相关、装瓶、消毒、无菌苗增殖、生根、锻炼、移栽等过程全部放在实验室和温室中进行,即为工厂化育苗。目前,这样的生产线已在意大利和法国投入使用。但外植体接种尚需人工操作。

 

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